[E-BC-K091-M] Alkaline Phosphatase (ALP) Activity Assay Kit 요약정보 및 구매

96T

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96T

상품 상세설명

 

General information

Detection significance


Alkaline phosphatase (ALP) is a group of cytomembrane-related enzymes with hydrolysis and transfer activity, acting on a variety of phosphate substrates. ALP is a homologous dimerase and each catalytic site contains three metal ions. There are four isozymes in humans: tissue nonspecific ALP, intestinal ALP, placental ALP and genital cell ALP.

Detection principle


Alkaline phosphatase decompose benzene disodium phosphate to produce free phenol and phosphoric acid. Phenol react with 4-aminopyrline in alkaline solution and oxidizes with potassium ferricyanide to form red quinone derivative. The enzyme activity can be calculated indirectly by measuring the OD value.

Operation procedures

Plate set up


 

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

A

A

S1

S9

S17

S25

S33

S41

S49

S57

S65

S73

B

B

B

S2

S10

S18

S26

S34

S42

S50

S58

S66

S74

C

C

C

S3

S11

S19

S27

S35

S43

S51

S59

S67

S75

D

D

D

S4

S12

S20

S28

S36

S44

S52

S60

S68

S76

E

E

E

S5

S13

S21

S29

S37

S45

S53

S61

S69

S77

F

F

F

S6

S14

S22

S30

S38

S46

S54

S62

S70

S78

G

G

G

S7

S15

S23

S31

S39

S47

S55

S63

S71

S79

H

H

H

S8

S16

S24

S32

S40

S48

S56

S64

S72

S80

                                   [Note]: A-H, standard wells; S1-S80, sample wells.

The dilution of standard curve


Dilute 0.5 mg/mL Phenol standard stock solution with double distilled water to a serial concentration. The recommended dilution gradient is as follows: 0.5, 0.4, 0.3, 0.2, 0.1, 0.05, 0.025, 0 mg/mL. Then take the assay strictly according to the operation steps.

Operation steps


1.   Standard well: add 5 μL of standards with different concentrations into the wells of 96 well microplate.

Sample well: add 5 μL of Sample into the wells of 96 well microplate.

2.   Add 50 μL of working solution and mix fully for 30 s with Microplate reader.

3.   Incubate at 37 for 15 min, then add 150 μL of Reagent 3 immediately, mix fully.

4.   Measure the OD values of each well at 520 nm with Microplate reader.

Operation table

 

Standard tube

Sample tube

Standards with different concentrations (μL)

5

 

Sample (μL)

 

5

Working solution (μL)

50

50

Mix fully for 30 s with Microplat e reader and Incubate at 37℃ for 15 min.

Reagent 3 (μL)

150

150

Mix fully and Measure the OD values of each well at 520 nm with Microplate reader.

Performance characteristics

Technical parameter



Detection range0.13-50 King unit/10Average inter-assay CV8.5%
Sensitivity0.13 King unit/100 mAverage intra-assay CV5.1%
Average recovery rate94%

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