1. Blank well: add 0.4 mL of Reagent 1 application solution to the 5 mL EP tube.
Standard well: add 0.4 mL of 6 μg/mL standard solution to the 5 mL EP tube.
Sample well: add 0.4 mL of the upper clear liquid in sample preparation step to the 5 mL EP tube.
2. Add 0.5 mL of Reagent 2, 1 mL of Reagent 3 application solution and 0.25 mL of Reagent 4 application solution.
3. Mix fully with a vortex mixer and incubate at 37℃ water bath for 30 min.
4. Add 0.1 mL of Reagent 5 and mix fully with a vortex mixer.
5. Stand for 10 min at room temperature. Set the spectrophotometer to zero with double-distilled water and measure the OD values of each tube at 536 nm with 1 cm optical path cuvette.
| Blank tube | Standard tube | Sample tube |
Reagent 1 application solution (mL) | 0.4 |
|
|
6 μg/mL standard solution (mL) |
| 0.4 |
|
The upper clear liquid (mL) |
|
| 0.4 |
Reagent 2 (mL) | 0. 5 | 0.5 | 0.5 |
Reagent 3 application solution (mL) | 1 | 1 | 1 |
Reagent 4 application solution (mL) | 0.25 | 0.25 | 0.25 |
Mix fully and incubate at 37℃ water bath for 30 min. | |||
Reagent 5 (mL) | 0.1 | 0.1 | 0.1 |
Mix fully and stand for 10 min at room temperature. Set the spectrophotometer to zero with double-distilled water and measure the OD values of each tube at 536 nm with 1 cm optical path cuvette. |
Detection range | 0.35-20 μg/mL | Average inter-assay CV | 3.3% |
Sensitivity | 0.35 μg/mL | Average intra-assay CV | 2.3% |
Average recovery rate | 104% |
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